トラブルシューティング¶

X線誘導凝集の影響を低減する¶

サンプルのX線誘起凝集の影響を低減するために、いくつかの実用的なステップをとることができる。放射線損傷は、高輝度のシンクロトロンSAXSビームラインでは特に重要であるが、ラボベースのX線源にさらされたサンプルでも容易に発生する可能性がある。

一般的な仮説は、水のヒドロキシル、ヒドロペルオキシルラジカルおよび溶媒和電子への光分解によってX線放射損傷が引き起こされることである。これらの高反応性の化学種は、タンパク質を自己会合させ、不可逆的に凝集させる可能性がある。放射線損傷はSAXSデータで次のように検出できる。

処理されたSAXSデータにおける \(I(0)\) および Rg の増加を監視する。

非差分（または差分）された時間フレームの全てのSAXSプロファイル、 \(I(q)\) 対 q を直接比較し、小角でのフレーム間の強度の有意差を、例えば相関マップ法を用いて、識別する。

放射線被害の影響を抑制するための措置の詳細については、図のトラブルシューティングのフローチャートを参照すること。

SAXSビームラインでのサンプルの放射線損傷を低減するためのオプションのフローチャート。もしX線放射線損傷がサンプル中で検出された場合、例えばX線露光中の \(I(0)\) および Rg の系統的増加が観察される場合、その影響を低減するために装置またはサンプルの両方から改善を実施することができる。放射線損傷の影響を抑制するために小分子（DTT、アスコルビン酸、グリセロール）を添加する場合は注意が必要である。これらの小分子は、サンプルを劇的に変えず、構造的変化または化学的誘導凝集を引き起こしてはならない。これは、SAXSを使用する前にDLSでテストできます。 SAXS測定に必要な正確なバックグラウンド差分を得るために、等量の小分子をサンプルおよびそれと一致した溶媒ブランクに添加することも重要である。